原代细胞制备与培养

将动物机体的各种组织从机体中取出，经各种酶(常用胰蛋白酶)、螯合剂(常用EDTA)或机械方法处理，分散成单细胞，置于合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖，这一过程称原代培养。原代细胞保留了很多来源组织的重要生理特性，能高度模仿体内的情况，且没有遗传和化学的改变。因此，原代细胞成为许多研究中理想的细胞模型。

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稳定细胞株构建

构建稳定细胞系的基本原理是将外源DNA克隆岛具有某种抗性的载体上吗，载体被转染岛宿主细胞并整合到宿主染色体中，用载体中所含的抗性标志进行筛选。最常用对的真核表达载体的抗性筛选标志物有新霉素、嘌呤霉素（puromycin），常用G418来代替新霉素进行选择性筛选，筛选得到可稳定表达目的蛋白，或者稳定表达沉默特定基因的细胞株。慢病毒几乎可以感染所有种类的细胞，并且在感染后可以整合到受感染细胞的基因组中，进行长时间的稳定表达，因此，慢病毒常用于制备稳定表达/沉默特定基因的单克隆细胞株。

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耐药细胞株构建

肿瘤细胞对化疗药物产生耐药性是肿瘤治疗失败的重要因素之一，成为目前阻碍肿瘤治疗的绊脚石。因此，探索肿瘤细胞产生耐药的原因以及如何改善肿瘤细胞对化疗药物耐药仍是目前研究的热点和难点。耐药细胞株构建原理：细胞与低剂量的药物长期接触，引起细胞本身药物化学过程的改变，细胞膜上出现Pgp糖蛋白，使细胞逐渐对药物耐受，随着药物浓度的递增，其耐受程度逐渐加强。

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RNA干扰

RNA 干扰（RNA interference, RNAi）技术，是将与内源mRNA 编码区同源的小片段（19~23 bp）外源双链 RNA（siRNA）导入细胞中，引发细胞中相应mRNA 高效特异性降解，从而导致特定基因表达沉默（knock down）的一种实验技术。其中通过构建载体表达siRNA 是多种siRNA 制备方法中唯一有可能进行长期基因沉默研究的方法，siRNA 载体可以在细胞内直接转录出shRNA，其干扰效果等同于siRNA，而且能够解决siRNA 干扰时间短的缺点。

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细胞增殖与毒性

直接测定DNA合成是细胞增殖检测的最准确方法之一，是测定物质毒性、评估药物安全评价、细胞健康的基本方法。利用MTT/CCK-8法进行检测。

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细胞凋亡

细胞凋亡是指由基因控制的细胞自主有序死亡的主动过程，涉及一系列基因的激活、表达以及调控等的作用。针对凋亡时期不同，检测的方法有所不同。金开瑞所提供的细胞凋亡检测技术服务，可用于检测不同类型、不同处理方式、不同时期细胞凋亡状况及分析凋亡细胞比例。

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细胞周期

细胞周期包括细胞分裂间期和细胞分裂期（M期），前者包括G1期、S期和G2期，后者包括前期、中期、后期和末期，细胞暂时停止分裂和分化的时期称为G0期。根据细胞各个时期DNA含量的不同，可以对细胞周期进行检测。采用PI染色法检测细胞周期，可用于肿瘤病理学中判断肿瘤的增殖状态和倍体分析；用于分析药物对细胞增殖的影响。

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细胞迁移与侵袭

Transwell是一类有通透性的杯状的装置，放入培养板后，分为两室：Transwell小室内称上室，盛装上层培养液；培养板内称下室，盛装下层培养液。上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔，以此研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。Transwell检测技术服务，用于测定细胞迁移及侵袭。

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ELISA检测

利用抗原抗体反应，检测样本中目的蛋白的浓度，常用于分泌蛋白的检测；可通过同批检测标准品，定量计算得到各实验组目的蛋白含量。ELISA是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的实验技术。

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裸鼠皮下成瘤实验

 裸鼠肿瘤模型是比较常见和常用的一种肿瘤动物模型，它在皮下移植瘤肿瘤模型的建立中起到重要作用。裸鼠肿瘤模型的接种一般有细胞接种和瘤块接种两种方式，接种取材有手术活检标本、癌性胸腹水标本和体外培养的细胞系三种。裸鼠移植瘤模型的建立具有建立周期短、成瘤率高、易于操作、成本低的优点。

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